El personaje de Harley Quinn hacía su primera aparición en Batman: The Animated Series, en concreto en el episodio 'The Joker's Favor', un capítulo en el que la joven se convierte en la mano derecha del Joker.
Tras el buen recibimiento que tuvo por parte de la audiencia, DC decidió incluirla en sus cómics, en concreto en el ejemplar Batman: Harley Quinn, en el que la joven tiene un origen similar al de los dibujos animados, aunque en él Quinn es más fuerte y veloz gracias a Poison Ivy. Además de en el mencionado cómic, su presonaje vuelve a ser introducido en No Man's Land, un tomo en el que se ve como la ciudad de Gotham se separa del resto del mundo debido a varios terremotos.
Aparentemente, la actriz australiana ha sido una de las principales figuras que ha impulsado este proyecto ya que, tras conseguir su papel en Escuadrón Suicida, empezó a documentarse sobre Harley Quinn y terminó fascinada con los personajes femeninos de DC Comics.
Esta será la primera vez que podamos ver a Harley Quinn en una película de acción real, pues hasta ahora solo había aparecido de carne y hueso en la pequeña pantalla, una en Birds of Prey y otra en un cameo en Arrow.
Este spin-off fue anunciado antes de estrenarse Escuadrón Suicida, la primera cinta en la que aparece la Harley Quinn de Margot Robbie.