'T.U.F.F. Puppy' gira en torno a una perro con pocas luces pero decidido llamado Dudley Puppy. Trabaja como espía para una organización llamada T.U.F.F. Su compañera es una gata llamada Kitty Katswell. Juntos protegerán Petropolis, la ciudad ficticia poblada por animales antropomórficos además de villanos como Verminious Snaptrap, el Camaleón y Bridbrain.
Dudley Puppy es el protagonista de la serie y tiene un corazón de una manada de perros adultos que nació para detener la maldad y la mezquindad en su camino. Kitty Katswell es la agente número uno de T.U.F.F y tiene un gran temperamento y fácilmente irritable. Keswick el el científico del cuartel y un tanto tartamudo. Y Herbert Dumbrowski es una dura pulga que dirige el cuartel T.U.F.F al que todos les llaman como "El Jefe".
La serie está creada por Butch Hartman ('Los Padrinos Mágicos') y algunos de sus voces originales son nada y menos Jerry Trainor ('Donnie Darko'), Daran Norris ('American Dad!'), Jeff Bennett ('Los PingÚinos de Madagascar') y Tom Kenny ('Hora de aventuras'), entre otros.
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